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反相高效液相色谱柱的保护要怎么做

时间:2020-06-24 点击次数:173
   反相高效液相色谱柱的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分先被冲洗出,而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。
 
  选择合适的色谱柱可以缩短方法开发时间,并使开发的方法更稳定。色谱柱的选择包括分离模式、色谱填料基质及基质物理化学性质等。
 
  反相高效液相色谱柱的保护:
  1、用预柱。(但要注意,若有时出峰异常,要先看看是不是它有问题了)
 
  2、每次做完分析,都要进行冲洗,分析用流动相中若无酸、盐类物质,建议用90%甲醇冲洗30~60min;若分析用流动相中含以上物质,要先用10%甲醇冲洗1小时左右,再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min。有必要时再循环几次,可以适当缩短时间。
  若长时间不用该色谱柱,要冲洗好后,用纯甲酵或乙封存。
 
  3、若流动相中用到离子对试剤,更应该好好冲洗,且该色谱柱作为专用,不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同,在该柱上所摸索的色谱条件,可能在其它同类柱子上得不到重现。
 
  4、尽量避免反冲,除非该色谱柱明确说明允许。
 
  5、普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度下分析。
 
  6、定期测柱效,有下降,可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善,可以再生,甲醇二氯甲烷一甲。

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